Extraction d'ARN par tissu
Chaque tissu offre une fenêtre différente sur le répertoire immunitaire du lama. Nous adaptons la source de prélèvement à votre projet.
De la cellule immunitaire à l'ARN codant le répertoire VHH.
L'ARN codant les domaines VHH est porté par les lymphocytes B et les plasmocytes du lama immunisé. Ces cellules se répartissent dans plusieurs compartiments — sang circulant, organes lymphoïdes secondaires, moelle osseuse — dont l'accessibilité et la composition en sous-populations cellulaires diffèrent.
Le choix du tissu dépend du stade d'immunisation, de la diversité de répertoire recherchée et du caractère plus ou moins invasif du prélèvement. Dans la grande majorité des projets, le sang périphérique suffit ; les tissus lymphoïdes profonds sont réservés aux besoins spécifiques de diversité ou de maturation plasmocytaire.
Quatre compartiments immunitaires, quatre profils de répertoire.
Sang périphérique
PBL / PBMC — voie standardLes lymphocytes du sang périphérique (PBL) ou les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) sont isolés par centrifugation sur gradient de densité après chaque prélèvement sanguin. C'est la source la moins invasive : elle peut être répétée à plusieurs points du calendrier d'immunisation pour suivre l'évolution du répertoire au fil des rappels, sans procédure chirurgicale.
Ganglions lymphatiques
Diversité B élevéeLes ganglions lymphatiques sont le site de maturation des lymphocytes B activés. Après les derniers rappels d'immunisation, ils sont particulièrement riches en plasmocytes producteurs d'anticorps de haute affinité, ce qui permet d'enrichir les banques en clones déjà maturés par hypermutation somatique.
Rate
Réservoir lymphoïdeOrgane lymphoïde secondaire majeur, la rate est mobilisée lorsqu'un accès tissulaire plus profond est requis pour maximiser la représentation du répertoire immunitaire, en complément ou en alternative au sang périphérique.
Moelle osseuse
Plasmocytes maturesLa moelle osseuse héberge les plasmocytes à longue durée de vie. C'est une source complémentaire pour les projets nécessitant un répertoire d'anticorps matures, stables dans le temps et représentatifs d'une mémoire immunitaire installée.
Quel tissu pour quel objectif ?
| Tissu | Caractère invasif | Diversité / profil | Cas d'usage |
|---|---|---|---|
| Sang périphérique (PBL/PBMC) | Minime — prélèvement sanguin | Standard, suivi possible dans le temps | Construction de banque immune de routine |
| Ganglions lymphatiques | Modérée | Élevée en plasmocytes matures | Enrichissement en clones de haute affinité |
| Rate | Invasive | Très élevée, large représentation | Projets nécessitant une diversité maximale |
| Moelle osseuse | Modérée à invasive | Plasmocytes à longue durée de vie | Répertoire d'anticorps matures et stables |
Extraction réalisée immédiatement après le prélèvement.
Isolation cellulaire
Les PBL/PBMC sont isolés par centrifugation sur gradient de densité (type Ficoll) directement après le prélèvement sanguin.
Extraction de l'ARN total
L'ARN total est extrait selon une méthode de référence (guanidinium thiocyanate–phénol–chloroforme), réalisée sans délai pour limiter la dégradation.
Transcription inverse
L'ARN messager est converti en ADNc par amorçage oligo(dT), point de départ pour l'amplification ultérieure du répertoire VHH.
Contrôle qualité
Chaque extrait est quantifié et son intégrité évaluée avant validation — voir notre page dédiée au contrôle qualité.