Extração de ARN por tecido
Cada tecido oferece uma janela diferente sobre o repertório imunitário da lama. Adaptamos a fonte de colheita ao seu projeto.
Da célula imunitária ao ARN que codifica o repertório VHH.
O ARN que codifica os domínios VHH é transportado pelos linfócitos B e plasmócitos da lama imunizada. Estas células distribuem-se por vários compartimentos — sangue circulante, órgãos linfoides secundários, medula óssea — cuja acessibilidade e composição de subpopulações celulares diferem.
A escolha do tecido depende da fase de imunização, da diversidade de repertório pretendida e do carácter mais ou menos invasivo da colheita. Na grande maioria dos projetos, o sangue periférico é suficiente; os tecidos linfoides profundos são reservados para necessidades específicas de diversidade ou maturação de plasmócitos.
Quatro compartimentos imunitários, quatro perfis de repertório.
Sangue periférico
PBL / PBMC — via padrãoOs linfócitos de sangue periférico (PBL) ou as células mononucleares de sangue periférico (PBMC) são isolados por centrifugação em gradiente de densidade após cada colheita de sangue. É a fonte menos invasiva: pode ser repetida em vários pontos do calendário de imunização para acompanhar a evolução do repertório ao longo dos reforços, sem procedimento cirúrgico.
Gânglios linfáticos
Elevada diversidade de células BOs gânglios linfáticos são o local de maturação dos linfócitos B ativados. Após os últimos reforços de imunização, são particularmente ricos em plasmócitos produtores de anticorpos de alta afinidade, permitindo enriquecer os bancos com clones já maturados por hipermutação somática.
Baço
Reservatório linfoideÓrgão linfoide secundário major, o baço é mobilizado quando é necessário um acesso tecidular mais profundo para maximizar a representação do repertório imunitário, como complemento ou alternativa ao sangue periférico.
Medula óssea
Plasmócitos madurosA medula óssea alberga plasmócitos de longa duração. É uma fonte complementar para projetos que necessitam de um repertório de anticorpos maduros, estáveis no tempo e representativos de uma memória imunitária estabelecida.
Que tecido para que objetivo?
| Tecido | Carácter invasivo | Diversidade / perfil | Caso de uso |
|---|---|---|---|
| Sangue periférico (PBL/PBMC) | Mínimo — colheita de sangue | Padrão, seguimento possível ao longo do tempo | Construção rotineira de banco imune |
| Gânglios linfáticos | Moderado | Elevada em plasmócitos maduros | Enriquecimento em clones de alta afinidade |
| Baço | Invasivo | Muito elevada, ampla representação | Projetos que requerem diversidade máxima |
| Medula óssea | Moderado a invasivo | Plasmócitos de longa duração | Repertório de anticorpos maduros e estáveis |
Extração realizada imediatamente após a colheita.
Isolamento celular
Os PBL/PBMC são isolados por centrifugação em gradiente de densidade (tipo Ficoll) diretamente após a colheita de sangue.
Extração de ARN total
O ARN total é extraído segundo um método de referência (tiocianato de guanidínio-fenol-clorofórmio), realizado sem demora para limitar a degradação.
Transcrição reversa
O ARN mensageiro é convertido em ADNc por iniciação oligo(dT), ponto de partida para a posterior amplificação do repertório VHH.
Controlo de qualidade
Cada extrato é quantificado e a sua integridade avaliada antes da validação — veja a nossa página dedicada ao controlo de qualidade.